紹介

人源化マウスを使用した多様な応用シナリオに対応するため、全ゲノム人源化マウスモデルは、研究者によってますます信頼され、好まれています。これらのモデルは、人間に近い遺伝子発現を示し、成功率が高く、また、小分子核酸薬の薬理学的研究にも重要です。

現在の技術の課題は何ですか？

多くの遺伝子は大きなスパンを持ち、100kbや200kbを超えています。これらの遺伝子を従来の受精卵ベースのCRISPR技術（最大編集20kb）や胚性幹細胞ベースの再組換え技術（最大編集30kb）でターゲットにすることは、重大な課題を呈しています。

BACトランスジェニック技術は200kb以上の大きな人間の遺伝子断片をマウスに転送できますが、これらのマウスはマウスの同源遺伝子を排除せず、品系構築に時間がかかり、急速に進化する科学研究の要求に追いついていません。

Biocytogenが開発したEGESの利点は何ですか？

Biocytogenが開発したEGES（胚性幹細胞ベースのEGE技術）は、CRISPR-Cas9とマウス胚性幹細胞（ES細胞）を使用して超長いDNA断片をターゲットにします。この技術は、マウスES細胞での大きな遺伝子断片の再組換え能力と、CRISPR/Cas9によるDNA二本鎖切断後の効率的なDNA再組換え修復メカニズムをうまく組み合わせています。

現在、この技術は約150 kbの遺伝子断片をターゲットにすることに成功しており、この能力を170 kbまで拡張する努力が続けられています。

ターゲティング戦略図

この技術は胚性幹細胞を基にしており、ES細胞再組換え技術の技術プロセスとタイムラインを模倣しています。唯一の違いは、ターゲティングベクターが外部で線状化する必要がない点です。ターゲティングベクターとsgRNAプラスミドを同時に幹細胞に電気穿孔した後、陽性クローンをスクリーニングします。全体のプロジェクトは、陽性のヘテロ接合小鼠を得るまでに約12ヶ月かかります。

EGES技術ワークフロー